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在细胞实验中，细胞不贴壁是一个常见且令人困扰的问题，它往往会给实验带来诸多不便，影响实验进行和结果的准确性。当遇到细胞不贴壁的情况时，我们可以从以下几个方面入手，排查不贴壁的原因并找寻相对应的解决方案。
01 细胞不贴壁的原因及解决方法
胰蛋白酶消化过度
胰酶处理时间过长，可能导致细胞膜蛋白受损，影响细胞贴壁； 解决方法：调整消化时间，缩短胰蛋白酶消化时间或降低其浓度，以减少细胞膜蛋白受损。微生物污染
支原体感染或其他微生物污染会导致细胞功能紊乱，影响贴壁能力；
解决方法：分离培养物，检测支原体。如果发现支原体污染，应丢弃培养物。
培养基pH值过碱
培养基pH值过高，可能导致细胞不适应，影响贴壁；
解决方法：使用无菌醋酸溶液，调整pH值或充入无菌CO₂以维持适宜的pH环境。
细胞老化
细胞传代次数过多，可能会导致细胞老化，失去贴附性;
解决方法：复苏新的细胞，使用20%血清帮助细胞复原并注意传代接种的细胞密度和时机。
接种细胞起始浓度不当
细胞接种量过低或过高，可能无法形成有效的细胞外基质，影响贴壁；
解决方法：改变培养液成分，使用含有促贴壁因子的培养基。
02 如何判断细胞是否受污染
看培养基的浊度和颜色变化
细菌和真菌污染通常会导致培养基迅速变浑浊，颜色也会发生变化。
镜下观察
用细胞间配置的显微镜可以观察到细菌和真菌的结构，有助于早期发现微生物污染。
培养基中的异味
某些微生物污染会产生易察觉的特殊气味，这可以帮助检测污染。
03 注意事项
在细胞培养过程中，必须严格遵循无菌操作技术，以防细胞遭受污染。要使用新鲜且质量达标的培养基及细胞株，以此来降低污染出现的可能性。还需要定期对细胞状态进行检查，如有需要，应及时对细胞进行传代或处理异常细胞。